Рис. 1. Микротом замораживающий с трубкой (1) для подвода углекислоты к ножу.
гистологи́ческая те́хника, комплекс методических приёмов, используемых в гистологии и патологии анатомии при изготовлении препаратов клеток, тканей и органов для их последующего микроскопирования.
Приготовление постоянных гистологических препаратов в виде тонких срезов состоит из следующих основных этапов: фиксации, промывки, обезвоживания и заливки кусочков, приготовления срезов, окрашивания, обезвоживания и заключения. Фиксация — сохранение структуры и в некоторой степени химического состава клеток и тканей путём быстрого воздействия на них химических или физических агентов, предотвращающих развитие посмертных изменений. Для фиксации используют растворы формальдегида (4%-ные), глютаральдегида (2—6%-ные), фиксирующие смеси, содержащие уксусную кислоту (жидкость Карнуа), пикриновую кислоту (жидкость Буэна). Один из лучших фиксаторов, используемый в электронномикроскопических исследованиях — раствор четырёхокиси осмия. При применении медленно проникающих фиксаторов (четырёхокись осмия, глютаральдегид) толщина кусочков тканей должна быть не более 2 мм. Наилучшие результаты даёт относительно длительная фиксация при t 2—4°C. Обызвествлённые ткани и структуры после фиксации подвергают декальцинации — обработке кислотами (азотной, соляной и др.) или электрическим током. По окончании фиксации кусочки промывают в воде или спирте. Дальнейшая обработка заключается в придании кусочкам однородной плотной консистенции, что необходимо для получения тонких срезов. Это достигается либо путём замораживания кусочков, либо путём пропитывания — заливки их различными застывающими средами. При изготовлении срезов на замораживающем микротоме (рис. 1) замораживание объектов достигается либо жидкой углекислотой, либо с помощью термоэлектрического охлаждающего столика ТОС. В микротоме-криостате МК-25 (рис. 2) имеется камера с низкой температурой, в которую заключён микротом. Из сред для заливки чаще применяют парафин и целлоидин. При заливке в парафин отмытую от фиксатора ткань обезвоживают (через спирты возрастающей крепости), проводят через промежуточный растворитель (ксилол или хлороформ) и пропитывают парафином при t 55—56°C, затем, быстро охлаждая кусочки, получают парафиновые блоки. При заливке в целлоидин промежуточным растворителем является спирт — эфир (1:1). Для получения срезов с парафиновых и целлоидиновых блоков используют санный микротом (рис. 3). Окрашиванием срезов достигают контрастирования различных структур клеток и тканей, по-разному воспринимающих те или иные красители.
Окрашивают срезы после удаления из них парафина (ксилолом), проводки их через спирты понижающейся концентрации и промывания в воде. Способы окрашивания препаратов многообразны. Из основных красителей чаще используют гематоксилин, кармин, сафранин, метиловый зелёный, галлоцианин; из кислых — эозин, эритрозин, кислый фуксин, индигокармин и др. Специальные красители выделяют определённые компоненты клеток и тканей, например, слизь окрашивается муцикармином, эластичные элементы — орсеином и др. Для приготовления препаратов нервной ткани применяют суправитальную окраску метиленовым синим и различные методы импрегнации — восстановление нервными структурами металлов, главным образом серебра. После окраски хорошо промытые препараты обезвоживают в спиртах восходящей крепости (до 100%), просветляют в смеси карболовой кислоты и ксилола (1:3), выдерживают в 2 порциях ксилола и затем заключают в среду, обеспечивающую сохранность структур объекта, его окраску и прозрачность (рис. 4), применяя для этого канадский или пихтовый бальзам, полистирол и др. В случаях, когда препарат нельзя приводить в контакт с ксилолом, спиртом, используют для заключения водорастворимые среды (глицерин, желатин или их смеси). Для изучения свежего материала (живых или переживающих объектов) изготовляют временные гистологические препараты, в которых объект заключают в физиологические растворы. Большие возможности для прижизненного исследования клеток даёт метод культуры тканей. См. также Микроскопическая техника, Микроскопия.
Литература:
Ромейс Б., Микроскопическая техника, пер. с нем., М., 1954;
Роскин Г. И., Левинсон Л. Б., Микроскопическая техника, 3 изд., М., 1957.
Рис. 2. Микротом-криостат.
1 — смотровое стекло;
2 — отверстия для рук;
3 — клавиши управления.
Рис. 3. Микротом санный для резки целлоидиновых и парафиновых блоков:
1 — станина;
2 — салазки с ножом;
3 — салазки с объектодержателем;
4 — рамка с ограничителем;
5 — микрометрический винт.
Рис. 4. Заключение препарата в бальзам.
https://veterinary.academic.ru/2140/%D0 ... 0%90%D0%AF